Flotillin-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420381

Panoramica

Flot1 codifica la flotillina-1, una proteina scaffolding conservata associata ai lipid raft, arricchita alla membrana plasmatica e nei compartimenti endosomiali, dove contribuisce a organizzare microdomini per la trasduzione del segnale. La flotillina-1 partecipa all’endocitosi indipendente dalla clatrina, al traffico di membrana e al rimodellamento del citoscheletro, influenzando l’internalizzazione dei recettori e le vie di segnalazione a valle, incluse le reti MAPK/ERK e delle chinasi della famiglia Src. Nelle cellule murine, la flotillina-1 è stata collegata alla regolazione dell’adesione e della migrazione cellulare, alla segnalazione dei recettori immunitari e alla funzione neuronale, attraverso i suoi ruoli nell’organizzazione di membrana e nella dinamica delle vescicole. Un’alterazione della biologia delle flotilline è stata associata a fenotipi proliferativi e migratori modificati ed è stata studiata nel contesto della segnalazione correlata al cancro, della neurodegenerazione e dei processi infiammatori, come modulatore meccanicistico più che come effettore diretto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Flotillin-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Flot1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Flot1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Flot1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Flotillin-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Flot1 per lo studio della segnalazione di Flotillin-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Flot1 critici per la funzione di Flotillin-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Flot1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Flotillin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Flotillin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Flot1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Flotillin-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Flotillin-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Flot1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Flot1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.