Flotillin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420381

概要

Flot1は、脂質ラフトに関連する保存性の高い足場タンパク質であるフロチリン-1をコードしており、フロチリン-1は形質膜およびエンドソーム区画に豊富に局在し、シグナル伝達のためのマイクロドメイン形成を助けます。フロチリン-1はクラスリン非依存性エンドサイトーシス、膜輸送、細胞骨格リモデリングに関与し、受容体の内在化や、MAPK/ERKおよびSrcファミリーキナーゼのネットワークを含む下流シグナル伝達経路に影響を与えます。マウス細胞では、膜構造の組織化と小胞動態における役割を通じて、細胞接着と遊走の制御、免疫受容体シグナル、神経機能の調節に関与することが示されています。フロチリンの生物学的機能の破綻は、増殖・遊走表現型の変化と関連づけられており、がん関連シグナル、神経変性、炎症過程の文脈で、直接の実行因子というよりは機構的モジュレーターとして研究されています。

Flotillin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFlot1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Flot1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Flot1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Flotillin-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Flotillin-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Flot1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Flotillin-1の機能に不可欠なFlot1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Flot1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Flotillin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびFlotillin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Flot1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Flotillin-1 HDRプラスミド（m）および Flotillin-1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFlot1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFlot1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。