FLG/Filaggrin Plasmide Double Nickase (h): sc-400644-NIC

FLG codifica la filaggrina, una proteina strutturale fondamentale prodotta come profilaggrina nei cheratinociti in differenziamento e processata proteoliticamente in monomeri di filaggrina, che aggregano i filamenti intermedi di cheratina. Questa funzione sostiene la differenziazione terminale dell’epidermide, la compattazione dei corneociti e la formazione della barriera dello strato corneo; inoltre, i suoi ulteriori prodotti di degradazione contribuiscono ai fattori naturali di idratazione (NMF) che regolano l’idratazione e il pH della superficie cutanea. L’attività di FLG è integrata con i programmi di cheratinizzazione e di assemblaggio dell’involucro corneo, a valle delle reti di segnalazione della differenziazione epidermica. La variabilità genetica o la ridotta espressione della filaggrina è fortemente associata a fenotipi di disfunzione della barriera e alla suscettibilità alle dermatosi infiammatorie, rendendo FLG un bersaglio frequente negli studi sull’omeostasi epiteliale e sui meccanismi dell’infiammazione cutanea.

FLG/Filaggrin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FLG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FLG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FLG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FLG interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.