FLAD1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406725

Visão geral

FLAD1 codifica a flavina adenina dinucleotídeo sintase 1, uma enzima bifuncional que catalisa a adenilação de FMN para gerar FAD, um cofator redox essencial requerido por numerosas flavoproteínas mitocondriais e citosólicas. Ao controlar a disponibilidade celular de FAD, a FLAD1 sustenta o metabolismo oxidativo, as reações de transferência de elétrons, a β-oxidação de ácidos graxos e a homeostase mitocondrial de forma mais ampla, conectando o metabolismo da riboflavina derivada de micronutrientes à produção de energia e ao equilíbrio redox. A perturbação da síntese de FAD pode desorganizar vias dependentes de flavoproteínas, alterar o manejo de espécies reativas de oxigênio e comprometer a capacidade bioenergética. Evidências genéticas e funcionais em humanos associam a disfunção de FLAD1 a erros inatos do metabolismo de flavinas e a fenótipos de doença mitocondrial, tornando-a relevante para estudos de estresse metabólico e biologia mitocondrial.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO FLAD1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene FLAD1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do FLAD1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do FLAD1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína FLAD1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de FLAD1 para a investigação da sinalização de FLAD1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) FLAD1 críticos para a função FLAD1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos FLAD1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo FLAD1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo FLAD1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus FLAD1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo FLAD1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR FLAD1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia FLAD1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo FLAD1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.