FKHRL1/FOXO3a Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400308-LAC

FOXO3 (FKHRL1/FOXO3a) è un fattore di trascrizione della famiglia forkhead box O che coordina le decisioni sul destino cellulare regolando geni coinvolti in apoptosi, arresto del ciclo cellulare, risposte al danno del DNA, resistenza allo stress ossidativo e autofagia. La sua attività è strettamente controllata da modificazioni post-traduzionali a valle della segnalazione PI3K–AKT, che modulano la localizzazione nucleare di FOXO3 e l’output trascrizionale; inoltre integra segnali provenienti dalle vie di AMPK e delle sirtuine durante lo stress metabolico. Programmi dipendenti da FOXO3 influenzano l’omeostasi immunitaria, il mantenimento di cellule staminali/progenitrici e la senescenza cellulare, collegando questo fattore a fenotipi associati all’invecchiamento. Una segnalazione di FOXO3 deregolata è stata implicata nella biologia tumorale e nella resistenza allo stress, nonché nei meccanismi di malattie cardiometaboliche e neurodegenerative attraverso reti trascrizionali di risposta allo stress alterate.

Le particelle di attivazione lentivirale FKHRL1/FOXO3a (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FOXO3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FKHRL1/FOXO3a (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FOXO3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FKHRL1/FOXO3a. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FOXO3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.