FKHRL1/FOXO3a CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400308-ACT

FOXO3（FKHRL1/FOXO3a）はフォークヘッドボックス型の転写因子であり、インスリン／IGF-1–PI3K–AKTシグナル伝達と細胞ストレス応答を統合して、アポトーシス、細胞周期停止、DNA損傷修復、オートファジー、抗酸化防御を制御する遺伝子群の発現を調節する。AKTによるリン酸化はFOXO3の核外移行を促進する一方、酸化ストレスやAMPK依存的なシグナルは核内での活性化を促し、代謝恒常性と生存に関連する転写プログラムを誘導する。さらにFOXO3は、TGF-β、MAPK、mTOR経路とも相互作用し、細胞種を超えて分化や免疫・炎症応答の出力を形作る。FOXO3の制御異常は、腫瘍生物学、神経変性過程、心代謝表現型、加齢関連形質と関連づけられており、ストレス適応の機構研究における共通の結節点となっている。

FKHRL1/FOXO3a CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FOXO3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FKHRL1/FOXO3a CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FOXO3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFOXO3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FKHRL1/FOXO3aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFOXO3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFKHRL1/FOXO3a依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFOXO3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFKHRL1/FOXO3a経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。