FKBP12.6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401445-ACT

FKBP1B codifica a FKBP12.6, uma imunofilina isomerase peptidil-prolil cis–trans que se liga a canais intracelulares de liberação de cálcio e modula o acoplamento excitação–contração. A FKBP12.6 interage com receptores de rianodina, particularmente o RyR2, estabilizando o gating (abertura/fechamento) do canal e contribuindo para a homeostase de cálcio em cardiomiócitos e outras células excitáveis. Por meio dessas interações, a FKBP12.6 influencia cascatas de sinalização dependentes de Ca2+ que regulam a função mitocondrial, respostas ao estresse oxidativo e programas transcricionais ligados ao remodelamento celular. A desregulação da expressão de FKBP1B ou alterações no acoplamento FKBP12.6–RyR têm sido associadas a perturbações no manejo de cálcio observadas em contextos de pesquisa sobre doenças cardiovasculares e neuromusculares.

FKBP12.6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FKBP1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FKBP12.6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FKBP1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FKBP1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FKBP12.6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FKBP1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FKBP12.6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FKBP12.6 em células tumorais com expressão de FKBP1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.