Filamin 1 Plasmide Double Nickase (m): sc-431396-NIC

Il gene **Flna** del topo codifica la **filamina 1**, una grande proteina di impalcatura legante l’actina che reticola le reti di **F-actina** e coordina la segnalazione dei recettori di membrana con il rimodellamento del citoscheletro. La filamina 1 regola la forma cellulare, l’adesione e la meccanotrasduzione organizzando complessi che coinvolgono integrine, piccole GTPasi e diversi recettori transmembrana, influenzando così la migrazione e la morfogenesi tissutale. In molte tipologie cellulari, le dinamiche del citoscheletro dipendenti da FLNA si intersecano con le vie che controllano il turnover delle adesioni focali e la trasmissione delle forze, rendendo **Flna** un determinante chiave dei programmi di polarità e motilità. L’alterazione o la disregolazione della filamina 1 è stata associata ad anomalie dello sviluppo e a fenotipi rilevanti per la malattia legati a migrazione cellulare aberrante e a difetti vascolari o del tessuto connettivo, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico in studi incentrati sul citoscheletro.

Filamin 1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Flna nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Flna. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Flna. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Flna interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.