Fibulin-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432105

Panoramica

Efemp1 codifica la fibulina-3, una glicoproteina secreta della matrice extracellulare che si associa alle fibre elastiche e ai componenti della membrana basale per regolare l’organizzazione della matrice, l’adesione cellulare e la biomeccanica dei tessuti. La fibulina-3 influenza il rimodellamento della matrice extracellulare attraverso interazioni con le metalloproteinasi e i loro inibitori, modulando la proteostasi e i segnali che incidono sull’angiogenesi e sulla migrazione cellulare. Nei tessuti murini, Efemp1 contribuisce all’omeostasi del tessuto connettivo e vascolare ed è stato associato a fenotipi degenerativi e fibrotici quando è deregolato. Queste proprietà rendono Efemp1 un bersaglio utile per analizzare i percorsi guidati dalla matrice extracellulare nello sviluppo, nell’invecchiamento e nel rimodellamento associato all’infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Fibulin-3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Efemp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Efemp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Efemp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Fibulin-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Efemp1 per lo studio della segnalazione di Fibulin-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Efemp1 critici per la funzione di Fibulin-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Efemp1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Fibulin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Fibulin-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Efemp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Fibulin-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Fibulin-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Efemp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Efemp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.