fibrillin-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406714

Panoramica

FBN2 codifica la fibrillina-2, una grande glicoproteina della matrice extracellulare che polimerizza in microfibrille e contribuisce all’assemblaggio delle fibre elastiche e all’architettura del tessuto connettivo. Le microfibrille contenenti fibrillina-2 forniscono supporto strutturale e regolano la biodisponibilità dei fattori di crescita, influenzando vie di segnalazione come TGF-β e BMP che governano la morfogenesi e l’omeostasi tissutale. Attraverso interazioni con le integrine e con proteine associate alla matrice, la fibrillina-2 modula l’adesione cellulare, la meccanotrasduzione e il rimodellamento della matrice extracellulare. Alterazioni genetiche di FBN2 sono associate a fenotipi congeniti del tessuto connettivo, rendendolo rilevante per studi di biologia della matrice nello sviluppo e di segnalazione disfunzionale dei fattori di crescita.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO fibrillin-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FBN2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FBN2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FBN2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina fibrillin-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FBN2 per lo studio della segnalazione di fibrillin-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FBN2 critici per la funzione di fibrillin-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FBN2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal fibrillin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal fibrillin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FBN2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal fibrillin-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR fibrillin-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FBN2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FBN2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.