Fhit Plasmide Double Nickase (h): sc-404220-NIC

FHIT codifica Fhit, una proteina legante nucleotidi della famiglia histidine triad (HIT), spesso implicata nel mantenimento della stabilità genomica e dell’omeostasi cellulare. Fhit partecipa alla segnalazione in risposta allo stress ed è collegata alla regolazione della proliferazione e dell’apoptosi, con connessioni funzionali alle risposte al danno al DNA e al controllo dei checkpoint. Un’alterata espressione di FHIT o la sua disruzione nel sito fragile comune FRA3B è osservata in molteplici tipi di tumore, rendendolo un modello ampiamente utilizzato per studiare la perdita di geni oncosoppressori e la fragilità cromosomica. Nei sistemi cellulari, la perturbazione di FHIT viene impiegata per esaminare come l’instabilità del genoma e una segnalazione di crescita aberrante emergano dalla perdita di un nodo regolatorio conservato.

Fhit Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FHIT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FHIT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FHIT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FHIT interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.