FGF-19 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401725-LAC

FGF19 codifica il fattore di crescita dei fibroblasti 19 (FGF-19), un FGF endocrino che regola l’omeostasi degli acidi biliari, il metabolismo lipidico e il bilancio energetico attraverso la segnalazione recettoriale in collaborazione con il co-recettore β-Klotho. Nei tessuti bersaglio, FGF-19 interagisce principalmente con FGFR4 per attivare a valle le vie MAPK/ERK e i relativi programmi trascrizionali, collegando il sensing dei nutrienti all’espressione genica epatobiliare e metabolica. Alterazioni dell’espressione di FGF19 o dell’attività della via di FGFR4 sono state associate a una sintesi degli acidi biliari deregolata e a disfunzione metabolica, e il gene è spesso studiato nel contesto della biologia epatica e della segnalazione guidata da fattori di crescita. In quanto ligando secreto, FGF-19 supporta anche indagini meccanicistiche sulla comunicazione paracrina/endocrina e sul crosstalk tra vie di segnalazione in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale FGF-19 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FGF19 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FGF-19 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FGF19, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FGF-19. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FGF19 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.