FGF-19 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401725-ACT

FGF19 codifica o fator de crescimento fibroblástico endócrino FGF-19, um regulador-chave da homeostase dos ácidos biliares, do manejo de lipídios e do metabolismo da glicose. Em conjunto com o FGFR4 e o co-receptor β-Klotho, a sinalização de FGF-19 ativa MAPK/ERK e programas transcricionais relacionados a jusante, que coordenam o fluxo metabólico hepático e a inibição por feedback da síntese de ácidos biliares. Fisiologicamente, esse eixo conecta a detecção intestinal de nutrientes à função hepática e contribui para o controle do balanço energético e de sinais de proliferação celular. A desregulação da sinalização FGF19–FGFR4 tem sido implicada na biologia de doenças metabólicas e no acionamento de vias oncogênicas em múltiplos contextos teciduais, sustentando seu uso como um nó mecanístico para investigação de vias.

FGF-19 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FGF19 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FGF-19 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FGF19 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FGF19, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FGF-19. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FGF19 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FGF-19 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FGF-19 em células tumorais com expressão de FGF19 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.