Fe65 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403226-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Fe65O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Fe65 (h) e o Plasmídeo Double Nickase Fe65 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para APBB1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Fe65 Anticorpo (F-6): sc-398389
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Fe65 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-403226-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Fe65 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-403226-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APBB1 codifica a Fe65, uma proteína adaptadora que se liga à cauda citoplasmática da proteína precursora do amiloide (APP) por meio de seus domínios de ligação a fosfotirosina e coordena complexos multiproteicos envolvidos na sinalização neuronal. A Fe65 participa do tráfego endocítico, da função sináptica e da regulação da expressão gênica por meio de interações com a maquinaria de processamento de APP e co-reguladores nucleares. Essas atividades conectam a APBB1 a vias que governam a clivagem de APP, a sinalização intracelular e a transcrição dependente de atividade. Alterações nas interações Fe65–APP e na sinalização a jusante têm sido estudadas no contexto de neurodegeneração e do processamento amiloidogênico, reforçando sua relevância em modelos mecanísticos da doença de Alzheimer e de neuropatologias relacionadas.
Fe65 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus APBB1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de APBB1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função APBB1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com APBB1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.