FCRLM1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417336-ACT

FCRLA codifica o Fc receptor–like A, uma proteína intracelular da família dos FcR expressa predominantemente em células da linhagem B e associada ao retículo endoplasmático e a compartimentos que contêm imunoglobulinas. Está implicada na diferenciação de células B e na homeostase imunitária ao influenciar a montagem/tráfego de imunoglobulinas e redes de sinalização que moldam respostas dependentes de antigénio. Padrões de expressão alterados de genes Fc receptor–like, incluindo o FCRLA, têm sido relatados em neoplasias de células B e em estados imunitários associados a autoimunidade, sustentando o seu valor como marcador e como nó mecanístico na biologia das células B. O estudo da regulação do FCRLA ajuda a definir vias que controlam a ativação de células B, a produção de anticorpos e respostas ao stress ligadas à desregulação da imunidade humoral.

FCRLM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FCRLA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FCRLM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FCRLA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FCRLA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FCRLM1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FCRLA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FCRLM1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FCRLM1 em células tumorais com expressão de FCRLA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.