FBXW2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406409

概要

FBXW2は、F-boxおよびWDリピート含有タンパク質をコードしており、SCF（SKP1–CUL1–F-box）型E3ユビキチンリガーゼ複合体における基質認識コンポーネントとして機能し、特定タンパク質のユビキチン化とプロテアソーム分解を指向するのを助けます。シグナル伝達や細胞周期に関連する因子の制御されたターンオーバーを通じて、FBXW2はプロテオスタシスに寄与し、増殖・分化・ストレス応答を制御する経路の微調整に関与します。ユビキチン介在性の制御異常は、がん化シグナルをはじめ、タンパク質恒常性の破綻を伴う他の疾患に共通してみられる特徴であるため、FBXW2は経路の再配線機構を解明する研究において重要な結節点となります。そのためFBXW2は、疾患関連の文脈において、標的分解プログラムが細胞表現型にどのように影響するかを検討する上で関心の高い分子です。

FBXW2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるFBXW2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、FBXW2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、FBXW2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、FBXW2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、FBXW2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、FBXW2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• FBXW2の機能に不可欠なFBXW2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、FBXW2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• FBXW2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFBXW2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、FBXW2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  FBXW2 HDRプラスミド（h）および FBXW2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFBXW2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFBXW2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。