FBL4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407372

Panoramica

FBXL4 codifica una proteina con dominio F-box e ripetizioni ricche in leucina (FBL4) che funge da componente di riconoscimento del substrato dei complessi E3 ubiquitina ligasi SCF (SKP1–CUL1–F-box), contribuendo a indirizzare specifiche proteine verso l’ubiquitinazione e la successiva degradazione proteasomiale. Attraverso la degradazione proteica regolata, FBL4 partecipa ai programmi di proteostasi cellulare che influenzano l’omeostasi mitocondriale, il metabolismo energetico e le risposte allo stress. Varianti patogene in FBXL4 sono state associate a gravi fenotipi encefalomiopatici mitocondriali caratterizzati da fosforilazione ossidativa compromessa e da un’alterazione dell’integrità della rete mitocondriale. Queste caratteristiche rendono FBXL4 un bersaglio rilevante per studiare come le vie mediate dall’ubiquitina si intersechino con la biogenesi e il controllo qualità dei mitocondri nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FBL4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FBXL4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FBXL4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FBXL4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FBL4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FBXL4 per lo studio della segnalazione di FBL4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FBXL4 critici per la funzione di FBL4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FBXL4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FBL4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FBL4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FBXL4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FBL4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FBL4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FBXL4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FBXL4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.