Fatso Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424024-ACT

O gene **Fto** em camundongo codifica a proteína **Fatso**, uma dioxigenase dependente de **Fe(II)/2-oxoglutarato** que atua como **desmetilase de RNA**, regulando de forma reversível a **N6-metiladenosina (m6A)** e outras marcas de metilação em RNA relacionadas. Ao modular o splicing, a estabilidade e a tradução do RNA, a Fatso influencia programas de expressão gênica ligados à homeostase energética, à adipogênese e a vias de sinalização metabólica. A atividade de Fto interage com redes de detecção de nutrientes e afeta transições de estado celular por meio do controle pós-transcricional de transcritos envolvidos na função mitocondrial e em respostas ao estresse. A expressão ou atividade desregulada de Fto tem sido associada, em sistemas modelo, a fenótipos ligados à obesidade, alterações no metabolismo da glicose e a características cardiometabólicas e neurocomportamentais mais amplas.

Fatso O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Fto sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Fatso O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Fto em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Fto, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Fatso. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Fto nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Fatso no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Fatso em células tumorais com expressão de Fto silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.