Plasmide Double Nickase (m) FAS: sc-420287-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) FAS correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FAS Double Nickase (m) et le plasmide FAS Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Fas. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FAS Antibody (C236): sc-21730
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) FAS | sc-420287-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) FAS | sc-420287-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Fas code pour le récepteur de mort FAS (CD95/TNFRSF6), un initiateur majeur de l’apoptose extrinsèque après sa liaison au ligand FAS et l’assemblage du complexe de signalisation inducteur de mort (DISC). L’activation du récepteur recrute FADD et favorise l’activation de la caspase‑8, reliant le signal aux caspases effectrices en aval et, dans certains contextes, à une amplification mitochondriale via le clivage de BID. Au-delà de l’apoptose, la signalisation FAS peut croiser les voies NF‑κB et MAPK et ainsi influencer l’homéostasie immunitaire, la tolérance périphérique et l’inflammation. Une activité FAS dérégulée est impliquée dans une délétion lymphocytaire défectueuse, des phénotypes auto-immuns et une susceptibilité modifiée à l’échappement tumoral au système immunitaire, faisant de Fas chez la souris une cible couramment utilisée pour des études mécanistiques en immunologie et en mort cellulaire.
FAS Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Fas dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Fas. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Fas. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Fas.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.