FANCA Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-420284-LAC

Il gene murino *Fanca* codifica FANCA, un componente essenziale della via di riparazione del DNA dell’anemia di Fanconi (FA), che salvaguarda l’integrità del genoma in condizioni di stress replicativo. FANCA partecipa all’assemblaggio e alla funzione del complesso core della FA, che promuove la monoubiquitinazione di FANCD2/FANCI, coordinando il riconoscimento dei crosslink interfilamento, la stabilizzazione della forcella replicativa accoppiata alla riparazione e l’interazione con i fattori della ricombinazione omologa. L’alterazione o l’insufficienza dei componenti della via FA è associata a instabilità cromosomica, ipersensibilità a lesioni da agenti che inducono crosslink del DNA e sindromi di insufficienza midollare tipiche dell’anemia di Fanconi, rendendo *Fanca* un nodo chiave per lo studio delle risposte allo stress genotossico. Nei sistemi murini, la biologia di FANCA è spesso utilizzata per modellare meccanismi conservati di segnalazione del danno al DNA, riparazione associata alla replicazione e fenotipi ematopoietici e dello sviluppo guidati da una riparazione dei crosslink compromessa.

Le particelle di attivazione lentivirale FANCA (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Fanca in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FANCA (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Fanca, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FANCA. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Fanca e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.