FAM20A Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-431579-LAC

Fam20a codifica a FAM20A, uma proteína da via secretória que atua como uma pseudocinase e parceira reguladora da caseína quinase do Golgi FAM20C, apoiando a fosforilação de proteínas da matriz extracelular e de proteínas secretadas. Em tecidos de camundongo, a FAM20A contribui para o processamento pós-traducional e a maturação de componentes da matriz mineralizada, conectando o tráfego Golgi/secretório à sinalização extracelular e à organização da matriz. A ruptura da fosforilação dependente de FAM20A–FAM20C pode alterar a biomineralização e as interações epitélio–mesênquima, tornando Fam20a relevante para estudos sobre formação do esmalte, homeostase mineral dos tecidos e biologia da via secretória. Assim, a perturbação genética e funcional de Fam20a é usada para investigar a regulação do fosfoproteoma extracelular e fenótipos do desenvolvimento impulsionados pela matriz.

As Partículas de Ativação Lentivirais FAM20A (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Fam20a numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais FAM20A (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Fam20a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de FAM20A. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Fam20a e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.