FAM186A CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-414163-ACT-2

ヒトFAM186Aは、特徴づけが十分でないタンパク質をコードしており、発現データおよび遺伝学的関連解析の結果から、細胞種特異的な制御プログラムや組織恒常性に関与することが示唆されている。その正確な分子機能は未解明であるものの、FAM186Aはしばしば、細胞分化やストレス適応応答に影響を及ぼす細胞内シグナル伝達および転写制御ネットワークの文脈で研究されている。FAM186Aの変異や発現異常は、複雑疾患の形質に関連するデータセットで報告されており、機能ゲノミクスを通じて病態機序への寄与を検討する動機となっている。FAM186Aの遺伝子編集は、ヒト細胞モデルにおける機能喪失・機能獲得解析、経路マッピング、表現型プロファイリングを可能にし、細胞プロセスや疾患関連分子シグネチャーに対する下流影響の解明に役立つ。

FAM186A CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FAM186Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FAM186A CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における FAM186A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFAM186A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FAM186Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFAM186A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFAM186A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFAM186A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFAM186A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。