FADS1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404735-NIC

FADS1 codifica a dessaturase de ácidos graxos 1, uma Δ5-dessaturase que catalisa uma etapa-chave e limitante da velocidade na biossíntese de ácidos graxos poli-insaturados de cadeia longa, ao converter o ácido dihomo-γ-linolênico em ácido araquidônico e substratos relacionados em precursores de eicosanoides a jusante. Por meio da regulação da composição lipídica de membrana e da disponibilidade de mediadores lipídicos, FADS1 influencia a sinalização inflamatória, a homeostase metabólica e processos de sinalização celular ligados à remodelação de fosfolipídios e ao metabolismo do ácido araquidônico. Variações genéticas e alterações na expressão de FADS1 têm sido associadas a mudanças nos perfis lipídicos circulantes e à suscetibilidade a características complexas envolvendo fenótipos cardiometabólicos e inflamatórios, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos de programas celulares conduzidos por lipídios. Em modelos de células humanas, a perturbação de FADS1 permite investigar o fluxo metabólico, a dinâmica de membrana e respostas transcricionais dependentes de mediadores lipídicos.

FADS1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus FADS1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de FADS1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função FADS1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com FADS1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.