FADS1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-429289-ACT

O gene Fads1 de camundongo codifica a dessaturase de ácidos gordos 1 (FADS1), uma Δ5-dessaturase microsomal que catalisa etapas-chave na biossíntese de ácidos gordos polinsaturados de cadeia longa a partir de ácidos gordos essenciais obtidos na dieta. Ao regular os reservatórios celulares de precursores do ácido araquidónico e do ácido eicosapentaenoico, a FADS1 influencia a composição lipídica das membranas e a disponibilidade de substratos para a produção de eicosanoides e de mediadores especializados pró-resolução. A atividade de Fads1 cruza-se com redes metabólicas lipídicas que envolvem a sinalização por PPAR, a remodelação de fosfolípidos e cascatas de sinalização inflamatória. Uma capacidade de dessaturação desregulada tem sido associada a alterações da homeostase metabólica e a fenótipos ligados à inflamação, tornando Fads1 um alvo relevante para estudos de sinalização dependente de lípidos e de mecanismos de doença em modelos murinos.

FADS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Fads1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FADS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Fads1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Fads1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FADS1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Fads1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FADS1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FADS1 em células tumorais com expressão de Fads1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.