Factor XIII A Plasmide Double Nickase (h): sc-402690-NIC

F13A1 codifica la subunità A del fattore XIII della coagulazione, una transglutaminasi che, dopo l’attivazione da parte della trombina, catalizza la reticolazione covalente della fibrina per stabilizzare i coaguli e regolare la fibrinolisi. Il fattore XIII A partecipa alla fase terminale della cascata coagulativa e contribuisce al rimodellamento della matrice extracellulare e alla riparazione delle ferite, reticolando la fibrina e altri substrati proteici. La compromissione o l’alterazione dell’attività di F13A1 è associata a un’anomala stabilità del coagulo e a fenotipi emorragici, e la reticolazione deregolata è stata studiata in contesti trombotici e infiammatori. In quanto enzima citosolico arricchito nelle cellule mieloidi che si integra funzionalmente nelle reti di fibrina, il fattore XIII A è rilevante anche per studi sulle interazioni piastrine–leucociti e sui meccanismi di riparazione tissutale.

Factor XIII A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus F13A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di F13A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di F13A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con F13A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.