Factor VIII Plasmide Double Nickase (h): sc-400373-NIC

Il gene umano **F8** codifica il fattore VIII della coagulazione, un cofattore glicoproteico che circola legato al fattore di von Willebrand e viene attivato dalla trombina durante la via intrinseca. Il fattore VIII attivato (FVIIIa) forma, insieme al fattore IXa, il complesso della tenasi intrinseca su superfici fosfolipidiche, accelerando l'attivazione del fattore X e la conseguente generazione di trombina nella cascata della coagulazione. Le varianti a perdita di funzione in **F8** riducono l'efficienza della via intrinseca e sono fortemente associate all'emofilia A, offrendo un punto d'ingresso molecolare per lo studio dell'emostasi, della biosintesi proteica endoteliale-epatica e della regolazione dei cofattori delle proteasi. La perturbazione sperimentale di **F8** consente analisi meccanicistiche della dinamica della rete coagulativa, della maturazione e secrezione di FVIII e delle interazioni con il vWF in modelli cellulari umani.

Factor VIII Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus F8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di F8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di F8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con F8 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.