Factor VIII Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400373-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Factor VIIIO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Factor VIII (h) e o Plasmídeo Double Nickase Factor VIII (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para F8. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Factor VIII light chain Anticorpo (RFFVIII C/5): sc-59512
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Factor VIII Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400373-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Factor VIII Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400373-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O gene humano **F8** codifica o fator VIII da coagulação, um cofator glicoproteico que circula ligado ao fator de von Willebrand e é ativado pela trombina durante a via intrínseca. O fator VIII ativado (FVIIIa) forma o complexo tenase intrínseco com o fator IXa em superfícies fosfolipídicas, acelerando a ativação do fator X e a geração subsequente de trombina na cascata de coagulação. Variantes com perda de função em **F8** reduzem a eficiência da via intrínseca e estão fortemente associadas à hemofilia A, oferecendo um ponto de entrada molecular para estudar a hemostase, a biossíntese proteica endotelial–hepática e a regulação de cofatores de proteases. A perturbação experimental de **F8** permite a análise mecanística da dinâmica da rede de coagulação, do processamento e da secreção do FVIII e das interações com o vWF em modelos celulares humanos.
Factor VIII O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus F8 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de F8. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função F8. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com F8 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.