F4/80 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420168

Panoramica

Adgre1 codifica l’antigene murino F4/80 (EMR1), un recettore di adesione accoppiato a proteine G della famiglia EGF-TM7, espresso in modo prominente sui macrofagi residenti nei tessuti e su popolazioni mieloidi correlate. F4/80 è comunemente utilizzato per identificare sottopopolazioni di macrofagi ed è stato implicato nella regolazione della differenziazione dei macrofagi, della localizzazione tissutale e dell’omeostasi immunitaria attraverso interazioni cellula–cellula e il rilevamento dei segnali ambientali. I suoi pattern di espressione si intersecano con vie che controllano l’attivazione dell’immunità innata, la presentazione dell’antigene e le reti di citochine infiammatorie nei microambienti tissutali. Alterazioni dell’abbondanza o della polarizzazione dei macrofagi associate all’espressione di Adgre1/F4/80 sono frequentemente studiate nei disturbi infiammatori, nelle malattie metaboliche, nella biologia delle infezioni, nella neuroinfiammazione e nella biologia dei macrofagi associati al tumore.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO F4/80 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adgre1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adgre1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adgre1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina F4/80.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adgre1 per lo studio della segnalazione di F4/80, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adgre1 critici per la funzione di F4/80
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adgre1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal F4/80 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal F4/80 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adgre1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal F4/80 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR F4/80 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adgre1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adgre1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.