Ets-2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-416381-NIC

ETS2 codifica Ets-2, um membro da família ETS de fatores de transcrição específicos de sequência que se ligam a motivos GGAA/T para regular programas de expressão gênica que controlam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e a sobrevivência. A atividade de Ets-2 é modulada por fosforilação dependente de MAPK/ERK e integra sinais a jusante de vias de fatores de crescimento e citocinas para moldar respostas transcricionais em diversos tipos celulares. Por meio da regulação de genes envolvidos na remodelação da matriz extracelular, na sinalização inflamatória e na proliferação, o ETS2 tem sido implicado em redes oncogênicas e supressoras de tumor dependentes do contexto, bem como em fenótipos imunes e do desenvolvimento. Alterações na dosagem de ETS2 ou na ativação de vias associadas têm sido relacionadas a neoplasias e à biologia ligada ao cromossomo 21, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de regulação transcricional e de crosstalk entre vias de sinalização.

Ets-2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ETS2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ETS2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ETS2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ETS2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.