Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ETBR Double Nickaseプラスミド (h): sc-401804-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- ETBR Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- ETBRダブルニカースプラスミド（h）およびETBRダブルニカースプラスミド（h2）は、EDNRBを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: ETBR 抗体 (5H2): sc-293198
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
ETBR Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401804-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ETBR Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401804-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EDNRBは、エンドセリン受容体B型（ETBR）をコードする遺伝子であり、エンドセリンペプチドに結合するGタンパク質共役受容体（GPCR）です。ETBRは、細胞内カルシウム動態、ホスホリパーゼC（PLC）シグナル伝達、ならびに下流のMAPK/ERK経路やPI3K関連経路の調節に関与します。ETBRの活性は、エンドセリン依存的なシグナル伝達ネットワークを介して、神経堤細胞の遊走と分化、メラノサイト（色素細胞）の発生、そして血管緊張の制御に寄与します。ヒトでは、EDNRBの機能不全は、ヒルシュスプルング病など腸管神経系の発生異常に関わる疾患や色素に関する表現型と関連しており、発生過程におけるパターニングや細胞運動プログラムでの役割を反映しています。EDNRBシグナルの変化は、腫瘍細胞と微小環境の相互作用や系譜可塑性の観点からも研究されており、GPCRシグナル伝達や発生関連経路の機構研究において重要です。
ETBR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EDNRB 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EDNRB内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EDNRBの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EDNRBが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。