Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Estrogen Receptor alpha Double Nickaseプラスミド (h): sc-400011-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Estrogen Receptor alpha Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Estrogen Receptor alphaダブルニカースプラスミド（h）およびEstrogen Receptor alphaダブルニカースプラスミド（h2）は、ESR1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Estrogen Receptor alpha 抗体 (F-10): sc-8002
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Estrogen Receptor alpha Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400011-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Estrogen Receptor alpha Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400011-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ESR1は、リガンドにより活性化される核内受容体であり、エストロゲン応答性の遺伝子プログラムを統括する転写因子として機能するエストロゲン受容体α（ERα）をコードします。ホルモン結合後、ERαはエストロゲン応答配列（ERE）および各種コレギュレーター複合体と相互作用し、クロマチンのアクセス性と転写を調節します。また、PI3K/AKT、MAPK/ERK、細胞周期制御ネットワークにまたがるシグナル伝達を統合します。ERαの活性は、複数組織における細胞増殖・分化・代謝恒常性を規定し、ESR1の制御異常や変異体は、ホルモン応答性腫瘍の生物学および内分泌シグナルの調節破綻に関する研究で頻繁に取り上げられています。ERα依存的転写はエピジェネティック制御や受容体間クロストークとも交差するため、ESR1はステロイド受容体シグナル伝達と転写ネットワーク構造の解明における中心的な標的です。
Estrogen Receptor alpha ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ESR1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ESR1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ESR1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ESR1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。