Estrogen Receptor alpha Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400011-ACT

ESR1 codifica o receptor de estrogênio alfa (ERα), um receptor nuclear ativado por ligante que se liga a elementos de resposta ao estrogênio e coordena programas transcricionais que governam a proliferação celular, a diferenciação e a homeostase metabólica. O ERα integra-se com corre-guladores e estabelece crosstalk com as vias PI3K/AKT, MAPK/ERK e de sinalização por fatores de crescimento para modular a acessibilidade da cromatina e a dinâmica de expressão gênica. Em tecidos humanos, a atividade de ESR1 é central para a fisiologia responsiva a hormônios e frequentemente está implicada em desregulações oncogênicas e endócrino-relacionadas por meio de expressão alterada, mutações ou reconfiguração de vias. Essas características fazem de ESR1 um nó-chave para o estudo da sinalização por hormônios esteroides, do controle transcricional e de mecanismos de retroalimentação de vias em modelos celulares relevantes.

Estrogen Receptor alpha O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ESR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Estrogen Receptor alpha O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ESR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ESR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Estrogen Receptor alpha. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ESR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Estrogen Receptor alpha no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Estrogen Receptor alpha em células tumorais com expressão de ESR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.