ESD Double Nickase Plasmid (h): sc-404314-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ESD Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ESD Double-Nickase-Plasmid (h) und ESD Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ESD abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ESD: sc-514892
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ESD Double Nickase Plasmid (h) | sc-404314-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ESD Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404314-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **ESD** kodiert eine **S-Formylglutathion-Hydrolase**, eine Serin-Hydrolase, die in der **Formaldehyd-Entgiftung** innerhalb des **glutathionabhängigen Alkohol-/Aldehyd-Stoffwechselwegs** wirkt. Durch die Hydrolyse von **S-Formylglutathion** zu **Glutathion** und **Formiat** unterstützt ESD das **zelluläre Redoxgleichgewicht** und begrenzt die Anreicherung **reaktiver Carbonylspezies**, die Proteine und Nukleinsäuren schädigen können. Die ESD-Aktivität überschneidet sich mit **Antworten auf oxidativen Stress** und der allgemeinen **metabolischen Homöostase** und verknüpft Störungen im Aldehyd-Handling mit **genotoxischem Stress** und veränderter **Zellviabilität**. Eine dysregulierte Kapazität zur Carbonyl-Entgiftung wurde in Zusammenhängen untersucht, in denen oxidativer Stress und Aldehydstress zu krankheitsassoziierten Phänotypen beitragen, einschließlich metabolischer und neurodegenerativer Prozesse.
ESD Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ESD-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ESD abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ESD-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ESD-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.