Erythropoietin/EPO CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400283

概要

EPOはエリスロポエチンをコードしており、エリスロポエチンは分泌型の糖タンパク質ホルモンとして、主にEPOR（エリスロポエチン受容体）を介したJAK2/STAT5シグナル伝達によって赤芽球系前駆細胞の生存・増殖・分化を制御します。加えて、PI3K/AKT経路やMAPK経路からの入力も受けます。成人の生理においてEPO産生は、HIFによる転写プログラムを介した酸素感知機構によって厳密に制御されており、低酸素状態と全身の赤血球恒常性が結び付けられています。EPO/EPOR軸の活性異常は、貧血や低酸素関連応答の基盤となる機序に関与しており、鉄代謝、炎症、組織酸素化に関するより広範な研究の一部としてもしばしば検討されます。EPOは分泌因子であるため、その遺伝子発現制御や下流シグナルの影響は、転写制御、サイトカインシグナルのクロストーク、低酸素ストレスに対する細胞適応を評価するための有用な指標にもなります。

Erythropoietin/EPO CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるEPO遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、EPO内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、EPOのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Erythropoietin/EPOタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Erythropoietin/EPOシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、EPO欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Erythropoietin/EPOの機能に不可欠なEPOエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、EPOゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Erythropoietin/EPO CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびErythropoietin/EPO CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、EPO遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Erythropoietin/EPO HDRプラスミド（h）および Erythropoietin/EPO HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEPOホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEPO標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。