Erythropoietin/EPO Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400283

Panoramica

EPO codifica l’eritropoietina, un ormone glicoproteico secreto che regola la sopravvivenza, la proliferazione e la differenziazione dei progenitori eritroidi principalmente attraverso la segnalazione JAK2/STAT5 mediata da EPOR, con contributi aggiuntivi delle vie PI3K/AKT e MAPK. Nella fisiologia dell’adulto, la produzione di EPO è strettamente controllata dal sensing dell’ossigeno tramite programmi trascrizionali regolati da HIF, collegando l’ipossia all’omeostasi sistemica dei globuli rossi. Un’attività deregolata dell’asse EPO/EPOR è rilevante per i meccanismi alla base dell’anemia e delle risposte associate all’ipossia, ed è spesso esaminata nell’ambito di studi più ampi sul metabolismo del ferro, l’infiammazione e l’ossigenazione tissutale. Poiché EPO è un fattore secreto, la sua regolazione genica e gli effetti a valle della segnalazione rappresentano anche utili indicatori del controllo trascrizionale, del cross-talk nella segnalazione citochinica e dell’adattamento cellulare allo stress da bassa disponibilità di ossigeno.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Erythropoietin/EPO (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EPO in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EPO insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EPO a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Erythropoietin/EPO.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EPO per lo studio della segnalazione di Erythropoietin/EPO, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EPO critici per la funzione di Erythropoietin/EPO
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EPO per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Erythropoietin/EPO CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Erythropoietin/EPO CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EPO. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Erythropoietin/EPO Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Erythropoietin/EPO (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EPO per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EPO definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.