ERp57 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-420698-NIC

O gene murino Pdia3 codifica a ERp57 (PDIA3), uma isomerase de dissulfeto de proteínas do retículo endoplasmático que coopera com a calnexina e a calreticulina para catalisar a dobragem oxidativa e o controlo de qualidade de glicoproteínas recém-sintetizadas. A atividade da ERp57 sustenta a proteostase no RE, a formação de pontes dissulfureto e a sinalização associada ao stress do RE e à resposta a proteínas mal dobradas (UPR), influenciando a apresentação de antigénios através do carregamento de péptidos no MHC de classe I. A desregulação da função de PDIA3/ERp57 tem sido associada a alterações do equilíbrio redox, a respostas ao stress proteotóxico e a vias implicadas na neurodegenerescência, na disfunção metabólica e na biologia tumoral. Como oxidoredutase multifuncional, a ERp57 também é estudada pelos seus papéis na homeostase do cálcio, na sinalização relacionada com a adesão celular e em programas transcricionais de adaptação ao stress.

ERp57 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Pdia3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Pdia3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Pdia3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Pdia3 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.