Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ERp57 Double Nickase Plasmid (h): sc-401497-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ERp57 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ERp57 Double-Nickase-Plasmid (h) und ERp57 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PDIA3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ERp57: sc-23886
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ERp57 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401497-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ERp57 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401497-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PDIA3 kodiert ERp57, ein Mitglied der Protein-Disulfid-Isomerase-Familie, das im endoplasmatischen Retikulum (ER) die Bildung und Umlagerung von Disulfidbrücken während der Faltung von Glykoproteinen katalysiert. ERp57 arbeitet mit Calnexin und Calreticulin in der ER-Qualitätskontrolle zusammen, unterstützt die Reifung sekretorischer und membranständiger Proteine und ist mit der Unfolded-Protein-Response sowie den ER-assoziierten Abbauwegen (ERAD) verknüpft. Über die Proteinfaltung hinaus trägt ERp57 zur Antigenpräsentation über das Beladen von MHC‑Klasse‑I-Molekülen mit Peptiden bei und beeinflusst redoxregulierte Signalprozesse. Eine Fehlregulation der von PDIA3/ERp57 abhängigen Proteostase- und immunbezogenen Funktionen wurde mit zellulären Stressphänotypen in Verbindung gebracht und wird in Kontexten wie Neurodegeneration, metabolischem Stress und der Krebszellbiologie untersucht.
ERp57 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PDIA3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PDIA3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PDIA3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PDIA3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.