Erg-1/2/3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400404-LAC

ERG codifica un fattore di trascrizione della famiglia ETS che regola programmi di espressione genica responsabili del mantenimento delle cellule staminali e progenitrici ematopoietiche, della differenziazione endoteliale e dell’integrità vascolare. Attraverso il legame al DNA in modo sequenza-specifico, ERG integra segnali provenienti da vie quali MAPK/ERK e PI3K/AKT per modulare proliferazione, sopravvivenza, adesione e impegno di linea. Un’attività di ERG deregolata è fortemente associata a una riprogrammazione trascrizionale oncogenica, incluse le riarrangiamenti TMPRSS2–ERG nel carcinoma della prostata e l’espressione aberrante di ERG nelle leucemie acute. Queste caratteristiche rendono ERG un nodo molecolare ampiamente utilizzato per studiare il controllo trascrizionale, lo stato della cromatina e le reti di specificazione di linea in modelli di biologia del cancro e vascolare.

Le particelle di attivazione lentivirale Erg-1/2/3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ERG in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Erg-1/2/3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ERG, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Erg-1/2/3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ERG e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.