eRF3a CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404748

概要

GSPT1は、真核生物の翻訳終結因子3a（eRF3a）をコードしています。eRF3aはリボソームに結合するGTPアーゼで、eRF1と協働して終止コドン認識後の翻訳終結を進め、さらにリボソームのリサイクリングを促進します。eRF3aは、GTP加水分解の制御や、ポリ(A)結合タンパク質ならびに他の翻訳因子との相互作用を通じて、mRNA監視、プロテオスタシス、タンパク質合成の忠実性の調整に寄与します。翻訳終結やRNA品質管理経路の制御異常は、細胞増殖プログラムやストレス応答の破綻と関連づけられており、GSPT1は、翻訳制御がシグナル伝達および恒常性維持ネットワークとどのように接続しているかを研究するうえで有用な結節点となります。生物医学研究では、eRF3aを撹乱することで、終止コドンのリードスルー機構、ナンセンス変異依存mRNA分解（NMD）との連関、ならびにプロテオーム維持の破綻によって顕在化する脆弱性の解明に活用できます。

eRF3a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGSPT1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GSPT1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GSPT1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、eRF3aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、eRF3aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GSPT1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• eRF3aの機能に不可欠なGSPT1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GSPT1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• eRF3a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびeRF3a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GSPT1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  eRF3a HDRプラスミド（h）および eRF3a HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGSPT1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGSPT1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。