ERF Double Nickaseプラスミド (h): sc-403877-NIC

ERF（ETS2 repressor factor）は、GGAA/Tモチーフに結合して、増殖・分化・細胞恒常性を制御する遺伝子プログラムを調節する、ETSファミリーの転写因子であり、広く発現しています。ERFはMAPK/ERKシグナル伝達の下流で機能し、リン酸化に依存したERFの局在や活性の変化が、転写抑制および転写活性化のダイナミクスを調整します。ERFは発生および造血に関わる経路の制御に寄与し、細胞周期制御やストレス応答に影響するより広範な転写ネットワークとも交差します。ERFの活性や発現が破綻するとMAPK経路の出力が変化し、頭蓋顔面の発生表現型や、がんに関連した転写プログラムの再編成などの文脈で関与が示唆されています。

ERF ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ERF 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ERF内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ERFの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ERFが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。