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ErbB3/HER3CRISPR激活质粒(h) | sc-400146-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
ErbB3/HER3CRISPR激活质粒(h2) | sc-400146-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
ERBB3 编码 ErbB3/HER3,是 ERBB 受体酪氨酸激酶家族成员之一,主要作为激酶活性受损的共受体发挥作用。与配体结合(如 neuregulin/神经调节蛋白)后,ErbB3 会与 ERBB2/HER2 及其他 ERBB 受体形成异源二聚体,从而启动 PI3K–AKT、MAPK/ERK 及相关的生长与存活信号通路。其胞质尾部含有多个 PI3K 对接位点,使其尽管自身催化活性有限,仍能与下游信号实现强耦联。ERBB3 表达或信号传导的失调与多种肿瘤背景下的致癌网络重塑、与转移相关的表型以及耐药机制有关。
ErbB3/HER3 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ERBB3的表达。
ErbB3/HER3 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的ERBB3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于ERBB3转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ErbB3/HER3表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的ERBB3位点,并能够研究内源性位点上依赖于ErbB3/HER3的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ERBB3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ErbB3/HER3通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。