Epidermis-type 12-LO Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419088

Visão geral

Alox12b codifica a 12-lipoxigenase do tipo epidérmico (12-LO), uma dioxigenase dependente de ferro não heme que oxida ácidos graxos poli-insaturados esterificados para gerar intermediários lipídicos hidroperóxidos. Na epiderme de camundongos, o ALOX12B atua na via das lipoxigenases que sustenta o processamento de acilceramidas e a formação da barreira lipídica do estrato córneo, coordenando a diferenciação terminal de queratinócitos e a cornificação. Alterações na atividade da 12-LO afetam a homeostase lipídica epidérmica, a sinalização oxidativa por lipídios e a integridade da barreira — processos comumente estudados em modelos de fenótipos semelhantes à ictiose, dermatite e estresse inflamatório cutâneo. Como resultado, Alox12b é um ponto de partida útil para dissecar as contribuições do metabolismo lipídico para a função de barreira epitelial e a sinalização imune cutânea.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Epidermis-type 12-LO (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Alox12b em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Alox12b, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Alox12b na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Epidermis-type 12-LO.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Alox12b para a investigação da sinalização de Epidermis-type 12-LO, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Alox12b críticos para a função Epidermis-type 12-LO
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Alox12b para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Epidermis-type 12-LO Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Epidermis-type 12-LO Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Alox12b. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Epidermis-type 12-LO Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Epidermis-type 12-LO (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Alox12b para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Alox12b definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.