EPHX2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402095-NIC

EPHX2 codifica l’epossido idrolasi solubile (sEH), un enzima bifunzionale che converte gli epossidi lipidici derivati da acidi grassi polinsaturi nei corrispondenti dioli, modulando così l’equilibrio degli acidi epossieicosatrienoici e di altri acidi grassi epossidati correlati. Attraverso questa fase di idrolisi degli epossidi, EPHX2 influenza le vie di segnalazione degli eicosanoidi e degli ossilipini che regolano il tono vascolare, la segnalazione infiammatoria, le risposte allo stress ossidativo e il metabolismo cellulare. Alterazioni dell’attività di EPHX2 e dei profili di ossilipini sono state associate a fenotipi cardiometabolici, tra cui ipertensione, insulino-resistenza e processi legati all’aterosclerosi, nonché a segnali neuroinfiammatori e correlati al dolore. Nella ricerca biomedica, EPHX2 viene comunemente studiato nel contesto della biologia dei mediatori lipidici, della funzione endoteliale e delle cellule immunitarie e delle vie di risposta allo stress che collegano input metabolici a output infiammatori.

sEH Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EPHX2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EPHX2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EPHX2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EPHX2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.