EPCR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402158-ACT

PROCR codifica o receptor endotelial da proteína C (EPCR), um receptor de superfície enriquecido em células endoteliais que se liga à proteína C e à proteína C ativada para regular a coagulação e a homeostase vascular. O EPCR participa de sinalização anticoagulante e citoprotetora por meio da via da proteína C, interagindo com respostas dependentes de PAR que influenciam a integridade da barreira endotelial e o tônus inflamatório. Alterações na expressão do EPCR ou o seu shedding (clivagem/libertação da forma solúvel) têm sido associadas a processos trombo-inflamatórios, disfunção endotelial e complicações vasculares relevantes para a biologia da sepse e para mecanismos de doença cardiovascular. Como marcador e regulador do estado endotelial, o EPCR é frequentemente avaliado em modelos de hemostasia, interações leucócito–endotélio e lesão microvascular.

EPCR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PROCR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EPCR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PROCR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PROCR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EPCR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PROCR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EPCR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EPCR em células tumorais com expressão de PROCR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.