Ep-CAM Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421499-ACT

O gene **Epcam** de camundongo codifica a Ep-CAM, uma glicoproteína de adesão célula–célula independente de cálcio, enriquecida em tecidos epiteliais, que ajuda a organizar as junções aderentes e a regular a arquitetura epitelial. Além da adesão, a Ep-CAM participa de redes de sinalização que influenciam a proliferação e a diferenciação, incluindo a comunicação cruzada com programas transcricionais associados a Wnt/β-catenina e a modulação da dinâmica epitélio–mesênquima. A expressão alterada de **EPCAM** está ligada a mudanças na integridade da barreira e na plasticidade epitelial, frequentemente estudadas em modelos de biologia do desenvolvimento, regeneração tecidual e oncologia. Em sistemas murinos, **Epcam** é comumente usado como marcador e regulador funcional da identidade de linhagens epiteliais em contextos como biologia de organoides e progressão tumoral.

Ep-CAM O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Epcam sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ep-CAM O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Epcam em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Epcam, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ep-CAM. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Epcam nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ep-CAM no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ep-CAM em células tumorais com expressão de Epcam silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.