ENT2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419988
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ENT2 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico ENT2, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:ENT2 Anticorpo (D-9): sc-373871
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
ENT2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419988 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Slc29a2 codifica o transportador nucleosídico equilibrativo 2 (ENT2), um transportador de membrana plasmática amplamente expresso que medeia o fluxo bidirecional, dependente de concentração, de nucleósidos de purinas e pirimidinas, como adenosina e inosina. O ENT2 ajuda a regular as vias de salvamento de nucleósidos, os pools intracelulares de nucleotídeos e a homeostase extracelular de adenosina, influenciando assim a síntese de DNA/RNA, a energética celular e a sinalização purinérgica. Em sistemas murinos, a atividade alterada do ENT2 é relevante para estudos de respostas ao estresse metabólico, de sinalização imune e inflamatória impulsionada pela disponibilidade de nucleósidos e de modulação, mediada por transportadores, da captação de fármacos e análogos de nucleósidos. Portanto, Slc29a2 é frequentemente investigado em contextos que relacionam o transporte de nucleósidos à proliferação, diferenciação e homeostase tecidual.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ENT2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Slc29a2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Slc29a2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Slc29a2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ENT2.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Slc29a2 para a investigação da sinalização de ENT2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Slc29a2 críticos para a função ENT2
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Slc29a2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo ENT2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo ENT2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Slc29a2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo ENT2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR ENT2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Slc29a2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Slc29a2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.