EMID1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-431233-NIC

EMID1（EMIドメイン含有タンパク質1）は分泌性の細胞外マトリックス（ECM）関連タンパク質で、マウスにおける発生および組織恒常性の過程で、細胞周囲マトリックス（ペリセルラーマトリックス）の構築や細胞—マトリックス相互作用の調節に関与すると考えられています。ECMへの局在性と、タンパク質間相互作用に関与すると予測されるモジュールを持つことから、EMID1は接着依存性シグナル伝達、基底膜の組み立て、ならびに細胞移動や分化に影響する形態形成過程の制御という観点で研究されています。ECMの組成異常やリモデリングの破綻は、線維化、発生異常、腫瘍微小環境の変化に共通して見られる特徴であり、Emid1はマトリックス駆動性の表現型の機序研究において重要な標的となります。マウスのEmid1モデルは、ECM成分がどのようにシグナル出力を協調させ、組織構築やストレス応答に影響を与えるのかを解明するのに役立ちます。

EMID1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Emid1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Emid1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Emid1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Emid1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。