Embigin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408321-ACT

ヒトのEMBは、単一膜貫通型（Type I）の免疫グロブリンスーパーファミリーに属する糖タンパク質であるエンビギン（embigin）をコードしており、モノカルボン酸トランスポーター（MCT）の補助サブユニットとして機能するとともに、細胞—細胞間および細胞—細胞外マトリックス間の相互作用を調節します。エンビギンはMCT複合体を介した乳酸およびピルビン酸のフラックスを支えることで、増殖性組織における代謝恒常性、pH調節、ならびに微小環境への適応に寄与します。EMBに関連する生物学は、接着、遊走、栄養利用を制御する経路と交差しており、これらの過程は腫瘍形成や炎症状態でしばしば再配線されます。エンビギン発現の異常は複数の疾患関連状況で報告されており、代謝リモデリングや細胞浸潤性の機構研究における有用な結節点となります。

Embigin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EMBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Embigin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EMB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEMB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Embiginの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEMB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEmbigin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEMB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEmbigin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。