ELL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404784-ACT

ELL2 (leucemia 2 rica em lisina 11–19) codifica um fator de elongação da RNA polimerase II que aumenta a processividade da transcrição ao reduzir pausas e promover uma elongação produtiva. Como parceiro funcional do complexo de superelongação, a ELL2 ajuda a coordenar o processamento de RNA co-transcricional, incluindo a maturação de mRNA e programas regulados de expressão gênica na diferenciação e em respostas ao estresse. Em contextos imunológicos, a ELL2 está ligada à biologia de plasmócitos e à secreção de imunoglobulinas, refletindo sua influência em estados transcricionais de alta produção. A elongação transcricional desregulada envolvendo ELL2 tem sido associada a programas transcricionais relacionados a neoplasias hematológicas e a perturbações mais amplas nas vias de síntese de RNA.

ELL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ELL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ELL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ELL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ELL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ELL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ELL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ELL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ELL2 em células tumorais com expressão de ELL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.