EKLF/KLF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402366-ACT

KLF1 (fator eritroide do tipo Krüppel; EKLF) é um fator de transcrição restrito a uma linhagem que coordena a eritropoiese ao controlar programas de expressão gênica específicos de cada estágio em progenitores eritroides. Ele se liga a elementos CACCC e coopera com reguladores eritroides centrais para promover a troca de hemoglobina, a maturação da membrana e do citoesqueleto e a remodelação metabólica eritroide, integrando-se às redes transcricionais conduzidas por GATA1/TAL1. KLF1 também influencia o estado da cromatina por meio do recrutamento de co-reguladores, moldando a atividade de enhancers e as trajetórias de diferenciação eritroide. A desregulação ou mutação de KLF1 está associada a fenótipos hereditários de hemácias, incluindo expressão alterada de globinas e características ligadas à anemia, tornando-o um nó-chave para o estudo da regulação gênica eritroide e dos mecanismos de doenças hematológicas.

EKLF/KLF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KLF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EKLF/KLF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KLF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KLF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EKLF/KLF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KLF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EKLF/KLF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EKLF/KLF1 em células tumorais com expressão de KLF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.