Plásmido Doble Nickase (m) eIF4AIII: sc-431393-NIC

Eif4a3 codifica eIF4AIII, una helicasa de ARN tipo DEAD-box que actúa como componente central del complejo de unión a exones (exon junction complex, EJC), acoplando el empalme del pre-ARNm con procesos posteriores de exportación, localización, vigilancia y traducción del ARNm. eIF4AIII participa en la degradación de ARNm mediada por codones sin sentido (nonsense-mediated mRNA decay, NMD) al estabilizar el depósito del EJC sobre transcritos empalmados y ayudar a definir codones de terminación prematuros. A través de estas funciones de procesamiento de ARN, Eif4a3 influye en la integridad del transcriptoma y en programas de proteostasis que modelan el control del ciclo celular, la diferenciación y la expresión génica sensible al estrés. La desregulación del EJC y de factores asociados a NMD se vincula con fenotipos del desarrollo y neurobiológicos, y se aprovecha con frecuencia para estudiar mecanismos de empalme aberrante y control de calidad del ARN en modelos relevantes para enfermedades.

eIF4AIII El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Eif4a3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Eif4a3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Eif4a3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Eif4a3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.