Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
eIF4AIII Plasmide Double Nickase (m): sc-431393-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- eIF4AIII Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il eIF4AIII Double Nickase Plasmid (m) e il eIF4AIII Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Eif4a3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: eIF4AIII Antibody (B-2): sc-365549
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
eIF4AIII Plasmide Double Nickase (m) | sc-431393-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF4AIII Plasmide Double Nickase (m2) | sc-431393-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Eif4a3 codifica per eIF4AIII, un’elicasi dell’RNA della famiglia DEAD-box che funge da componente centrale del complesso di giunzione esone-esone (exon junction complex, EJC), collegando lo splicing del pre-mRNA ai processi a valle di esportazione, localizzazione, sorveglianza e traduzione dell’mRNA. eIF4AIII partecipa alla degradazione dell’mRNA mediata da codoni di stop prematuri (nonsense-mediated mRNA decay, NMD) stabilizzando la deposizione dell’EJC sui trascritti sottoposti a splicing e contribuendo a definire i codoni di terminazione prematuri. Attraverso questi ruoli nel processamento dell’RNA, Eif4a3 influenza l’integrità del trascrittoma e i programmi di proteostasi che modellano il controllo del ciclo cellulare, la differenziazione e l’espressione genica in risposta allo stress. La disregolazione dell’EJC e dei fattori associati alla NMD è collegata a fenotipi dello sviluppo e neurobiologici ed è spesso sfruttata per studiare i meccanismi di splicing aberrante e di controllo qualità dell’RNA in modelli rilevanti per la malattia.
eIF4AIII Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Eif4a3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Eif4a3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Eif4a3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Eif4a3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.