eIF4AIII CRISPR Activationプラスミド (m): sc-431393-ACT

マウスEif4a3は、エクソン接合複合体（EJC）の中核構成要素として機能し、pre-mRNAスプライシングとその後のmRNA監視機構を結び付けるDEADボックスRNAヘリカーゼであるeIF4AIIIをコードする。eIF4AIIIは、スプライシング後の転写産物上へのEJCの沈着と安定化を助け、ナンセンス変異依存mRNA分解（NMD）、mRNA輸送、翻訳制御を支える。これらのRNA処理経路を通じて、Eif4a3は細胞周期の進行、分化、ストレス応答に重要なグローバルな遺伝子発現プログラムに影響を及ぼす。EJC機能やNMDの破綻は、神経発生やがんに関連するトランスクリプトームの不安定化と結び付けられており、Eif4a3はRNA品質管理の機構研究における有用な結節点となる。

eIF4AIII CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Eif4a3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

eIF4AIII CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Eif4a3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEif4a3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性eIF4AIIIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEif4a3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるeIF4AIII依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEif4a3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるeIF4AIII経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。