eIF4AI CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420146

概要

Eif4a1 は、マウスの eIF4AI（DEAD-box 型 RNA ヘリカーゼ）をコードしており、構造化された 5′ UTR をほどいてリボソームのスキャニングと開始コドン認識を可能にする、翻訳開始因子複合体 eIF4F の中核構成要素である。eIF4AI は ATP 依存的に mRNA の二次構造を再編成することでキャップ依存的翻訳を支え、プロテオスタシス、ストレス適応、細胞周期進行にも影響する。その活性は mTOR によるタンパク質合成制御と統合され、成長・代謝・分化に関わる選択的翻訳プログラムの形成に寄与しうる。eIF4A ファミリーのヘリカーゼが関与する翻訳開始動態の変化は、がん化シグナル、神経発達表現型、ストレス応答の破綻と関連づけられており、Eif4a1 は翻訳制御の機構研究において重要な解析対象となる。

eIF4AI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEif4a1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Eif4a1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Eif4a1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、eIF4AIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、eIF4AIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Eif4a1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• eIF4AIの機能に不可欠なEif4a1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Eif4a1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• eIF4AI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびeIF4AI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Eif4a1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  eIF4AI HDRプラスミド（m）および eIF4AI HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEif4a1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEif4a1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。